9秒发货/有发票 梧三标准英文版 优质技术翻译  数据库收录:159759 最近更新:2020-02-02  
支付宝/对公账号 首页   询价  购买流程  英文样品 公司简介   购物车

GB 4789.34-2016

标准搜索结果: 'GB 4789.34-2016'
标准号码内文价格(元)第2步交付天数标准名称状态
GB 4789.34-2016 英文版 315 购买 现货,9秒内自动发货PDF,有增值税发票。 食品安全国家标准 食品微生物学检验 双歧杆菌检验 有效

   
标准详细信息 GB 4789.34-2016; GB4789.34-2016
中文名称: 食品安全国家标准 食品微生物学检验 双歧杆菌检验
英文名称: (Food safety national standard food microbiological examination bifidobacteria test)
行业: 国家标准
中标分类: X09
发布日期: 2016-12-23
实施日期: 2017-06-23
旧标准 (被替代): GB 4789.34-2012
标准依据: National Health and Family Planning Commission Notice No.17 of 2016

GB 4789.34-2016
National Food Safety Standard -- Food Microbiological Examination -- Examination of Bifidobacterium
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
食品微生物学检验 双歧杆菌检验
2016-12-23发布
2017-06-23实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 总 局 发 布
前言
本标准代替GB 4789.34-2012《食品安全国家标准 食品微生物学检验 双歧杆菌的鉴定》。
本标准与GB 4789.34-2012相比,主要变化如下:
---增加了双歧杆菌的计数方法;
---增加了 MRS培养基;
---修改了标准的适用范围;
---修改了附录B为可选项。
食品安全国家标准
食品微生物学检验 双歧杆菌检验
1 范围
本标准规定了双歧杆菌(Bifidobacterium)的鉴定及计数方法。
本标准适用于双歧杆菌纯菌菌种的鉴定及计数。本标准适用于食品中仅含有单一双歧杆菌的菌种
鉴定。本标准适用于食品中仅含有双歧杆菌属的计数,即食品中可包含一个或多个不同的双歧杆菌
菌种。
2 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
2.1 恒温培养箱:36℃±1℃。
2.2 冰箱:2℃~5℃。
2.3 天平:感量0.01g。
2.4 无菌试管:18mm×180mm、15mm×100mm。
2.5 无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器(200μL~1000μL)及
配套吸头。
2.6 无菌培养皿:直径90mm。
3 培养基和试剂
3.1 双歧杆菌培养基:见A.1。
3.2 PYG培养基:见A.2。
3.3 MRS培养基:见A.3。
3.4 甲醇:分析纯。
3.5 三氯甲烷:分析纯。
3.6 硫酸:分析纯。
3.7 冰乙酸:分析纯。
3.8 乳酸:分析纯。
4 检验程序
双歧杆菌的检验程序见图1。
图1 双歧杆菌的检验程序
5 操作步骤
5.1 无菌要求
全部操作过程均应遵循无菌操作程序。
5.2 双歧杆菌的鉴定
5.2.1 纯菌菌种
5.2.1.1 样品处理:半固体或液体菌种直接接种在双歧杆菌琼脂平板或 MRS琼脂平板。固体菌种或
真空冷冻干燥菌种,可先加适量灭菌生理盐水或其他适宜稀释液,溶解菌粉。
5.2.1.2 接种:接种于双歧杆菌琼脂平板或MRS琼脂平板。36℃±1℃厌氧培养48h±2h,可延长至
72h±2h。
5.2.2 食品样品
5.2.2.1 样品处理:取样25.0g(mL),置于装有225.0mL生理盐水的灭菌锥形瓶或均质袋内,于
8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1∶10的
样品匀液。冷冻样品可先使其在2℃~5℃条件下解冻,时间不超过18h;也可在温度不超过45℃的
条件解冻,时间不超过15min。
5.2.2.2 接种或涂布:将上述样品匀液接种在双歧杆菌琼脂平板或 MRS琼脂平板,或取0.1mL适当
稀释度的样品匀液均匀涂布在双歧杆菌琼脂平板或 MRS琼脂平板。36℃±1℃厌氧培养48h±2h,
可延长至72h±2h。
5.2.2.3 纯培养:挑取3个或以上的单个菌落接种于双歧杆菌琼脂平板或 MRS琼脂平板。36℃±
1℃厌氧培养48h±2h,可延长至72h±2h。
5.2.3 菌种鉴定
5.2.3.1 涂片镜检:挑取双歧杆菌平板或 MRS平板上生长的双歧杆菌单个菌落进行染色。双歧杆菌
为革兰氏染色阳性,呈短杆状、纤细杆状或球形,可形成各种分支或分叉等多形态,不抗酸,无芽孢,无
动力。
5.2.3.2 生化鉴定:挑取双歧杆菌平板或 MRS平板上生长的双歧杆菌单个菌落,进行生化反应检测。
过氧化氢酶试验为阴性。双歧杆菌的主要生化反应见表1。可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生
化鉴定系统。
表1 双歧杆菌菌种主要生化反应
编号 项目
两歧双歧杆菌
(B.bifidum)
婴儿双歧杆菌
(B.infantis)
长双歧杆菌
(B.longum)
青春双歧杆菌
(B.adolescentis)
(B.animalis)
短双歧杆菌
(B.breve)
1 L-阿拉伯糖 - - + + + -
2 D-核糖 - + + + + +
3 D-木糖 - + + d + +
4 L-木糖 - - - - - -
5 阿东醇 - - - - - -
6 D-半乳糖 d + + + d +
8 D-果糖 d + + d d +
9 D-甘露糖 - + + - - -
10 L-山梨糖 - - - - - -
表1(续)
编号 项目
两歧双歧杆菌
(B.bifidum)
婴儿双歧杆菌
(B.infantis)
(B.longum)
青春双歧杆菌
(B.adolescentis)
动物双歧杆菌
(B.animalis)
短双歧杆菌
(B.breve)
11 L-鼠李糖 - - - - - -
12 卫矛醇 - - - - - -
14 甘露醇 - - - -a - -a
15 山梨醇 - - - -a - -a
α-甲 基-D-葡 萄
糖甙
- - + - - -
N-乙 酰-葡 萄
糖胺
- - - - - +
苦杏仁甙(扁桃
- - - + + -
19 七叶灵 - - + + + -
20 水杨甙(柳醇) - + - + + -
21 D-纤维二糖 - + - d - -
22 D-麦芽糖 - + + + + +
23 D-乳糖 + + + + + +
24 D-蜜二糖 - + + + + +
25 D-蔗糖 - + + + + +
26 D-海藻糖(覃糖) - - - - - -
28 D-松三糖 - - + + - -
29 D-棉籽糖 - + + + + +
30 淀粉 - - - + - -
31 肝糖(糖原) - - - - - -
32 龙胆二糖 - + - + + +
33 葡萄糖酸钠 - - - + - -
注:+表示90%以上菌株阳性;-表示90%以上菌株阴性;d表示11%~89%以上菌株阳性;
a 表示某些菌株阳性。
5.2.3.3 有机酸测定:测定双歧杆菌的有机酸代谢产物(可选项),见附录B。
5.3.1 纯菌菌种
5.3.1.1 固体和半固体样品的制备:以无菌操作称取2.0g样品,置于盛有198.0mL稀释液的无菌均质
杯内,8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或置于盛有198.0mL稀释液的无菌均质袋中,用
拍击式均质器拍打1min~2min,制成1∶100的样品匀液。
5.3.1.2 液体样品的制备:以无菌操作量取1.0mL样品,置于9.0mL稀释液中,混匀,制成1∶10的样
品匀液。
5.3.2 食品样品
5.3.2.1 样品处理:取样25.0g(mL),置于装有225.0mL生理盐水的灭菌锥形瓶或均质袋内,于
8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1∶10的
条件解冻,时间不超过15min。
5.3.3 系列稀释及培养
用1mL无菌吸管或微量移液器,制备10倍系列稀释样品匀液,于8000r/min~10000r/min均
质1min~2min,或用拍击式均质器拍打1min~2min。每递增稀释一次,即换用1次1mL灭菌吸管
或吸头。根据对样品浓度的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液,在进行10倍递增稀释时,吸
取1.0mL样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取1.0mL空白稀释液加入
两个无菌平皿内作空白对照。及时将15mL~20mL冷却至46℃的双歧杆菌琼脂培养基或 MRS琼
脂培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。从样品稀释
到平板倾注要求在15min内完成。待琼脂凝固后,将平板翻转,36℃±1℃厌氧培养48h±2h,可延
5.3.4 菌落计数
5.3.4.1 可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以
菌落形成单位(colony-formingunits,CFU)表示。
5.3.4.2 选取菌落数在30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU
的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的
平均数。
5.3.4.3 其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释
度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以
2,代表一个平板菌落数。
5.3.5 结果的表述
5.3.5.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平
均值乘以相应稀释倍数,作为每克或每毫升中菌落总数结果。
5.3.5.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按式(1)计算:
N= 􀰐
(n1+0.1n2)d
(1)
式中:
N ---样品中菌落数;
n1 ---第一稀释度(低稀释倍数)平板个数;
n2 ---第二稀释度(高稀释倍数)平板个数;
d ---稀释因子(第一稀释度)。
5.3.5.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可
记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
5.3.5.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数
计算。
5.3.5.5 若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
5.3.5.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU~300CFU之间,其中一部分小于30CFU或大于
5.3.6 菌落数的报告
5.3.6.1 菌落数小于100CFU时,按“四舍五入”原则修约,以整数报告。
5.3.6.2 菌落数大于或等于100CFU时,第3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面
用0代替位数;也可用10的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。
5.3.6.3 称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/mL为单位报告。
5.4 结果与报告
根据5.2.3.1、5.2.3.2,5.2.3.3结果,报告双歧杆菌属的种名。根据5.3.6菌落计数结果出具报告,报
告单位以CFU/g(mL)表示。
附 录 A
A.1 双歧杆菌琼脂培养基
A.1.1 成分
蛋白胨 15.0g
酵母浸膏 2.0g
葡萄糖 20.0g
可溶性淀粉 0.5g
氯化钠 5.0g
西红柿浸出液 400.0mL
吐温80 1.0mL
琼脂粉 20.0g
加蒸馏水至 1000.0mL
A.1.2 制法
A.1.2.1 半胱氨酸盐溶液的配制:称取半胱氨酸0.5g,加入1.0mL盐酸,使半胱氨酸全部溶解,配制成
半胱氨酸盐溶液。
A.1.2.2 西红柿浸出液的制备:将新鲜的西红柿洗净后称重切碎,加等量的蒸馏水在100℃水浴中加
热,搅拌90min,然后用纱布过滤,校正pH7.0±0.1,将浸出液分装后,121℃高压灭菌15min~
20min。
A.1.2.3 制法:将A.1.1所有成分加入蒸馏水中,加热溶解,然后加入半胱氨酸盐溶液,校正pH至6.8
A.2 PYG液体培养基
A.2.1 成分
蛋白胨 10.0g
葡萄糖 2.5g
酵母粉 5.0g
半胱氨酸-HCl 0.25g
盐溶液 20.0mL
维生素K1 溶液 0.5mL
氯化血红素溶液5mg/mL 2.5mL
A.2.2 制法
A.2.2.1 盐溶液的配制:称取无水氯化钙0.2g,硫酸镁0.2g,磷酸氢二钾1.0g,磷酸二氢钾1.0g,碳酸
氢钠10.0g,氯化钠2.0g,加蒸馏水至1000mL。
A.2.2.2 氯化血红素溶液(5mg/mL)的配制:称取氯化血红素0.5g溶于1mol/L氢氧化钠1.0mL
中,加蒸馏水至100mL,121℃高压灭菌15min~20min。
A.2.2.3 维生素K1 溶液的配制:称取维生素K11.0g,加无水乙醇99.0mL,过滤除菌,避光冷藏保存。
A.2.2.4 制法:除氯化血红素溶液和维生素K1 溶液外,A.2.1其余成分加入蒸馏水中,加热溶解,校正
pH至6.0±0.1,加入中性红溶液。分装后121℃高压灭菌15min~20min。临用时加热熔化琼脂,加
入氯化血红素溶液和维生素K1 溶液,冷至50℃使用。
A.3.1 成分
蛋白胨 10.0g
牛肉粉 5.0g
酵母粉 4.0g
葡萄糖 20.0g
吐温80 1.0mL
K2HPO4·7H2O 2.0g
醋酸钠·3H2O 5.0g
柠檬酸三铵 2.0g
MnSO4·4H2O 0.05g
琼脂粉 15.0g
加蒸馏水至 1000.0mL
A.3.2 制法
将A.3.1所有成分加入蒸馏水中,加热溶解,调节pH至6.2±0.1,分装后121℃高压灭菌15min~
20min。
附 录 B
双歧杆菌的有机酸代谢产物检测方法
B.1 双歧杆菌培养液制备
接种菌的PYG液体培养基做空白对照,厌氧,36℃±1℃培养48h。
B.2 标准液的配制
B.2.1 乙酸标准溶液:准确吸取分析纯冰乙酸5.7mL,加水稀释至100.0mL,摇匀,进行标定,配成约
1.0mol/L的乙酸标准溶液。标定方法为:准确称取乙酸3.0g,加水15.0mL,酚酞指示液2滴,用
1.0mol/mL氢氧化钠溶液滴定,并将滴定结果用空白试验校正。1.0mL1mol/mL氢氧化钠溶液相当
于60.05mg的乙酸。
B.2.2 乙酸使用液:将经标定的乙酸标准溶液用水稀释至20.0mmol/L。
B.2.3 乳酸标准溶液:吸取分析纯乳酸8.4mL,加水稀释至100.0mL,摇匀,进行标定,配成约
1.0mol/L的乳酸标准溶液。标定方法为:准确称取乳酸1.0g,加水50.0mL,加入1mol/mL氢氧化
果用空白试验校正。1.0mL1mol/mL氢氧化钠溶液相当于90.08mg的乳酸。
B.2.4 乳酸使用液:将乳酸标准溶液用水稀释至20.0mmol/L。
B.3 方法
B.3.1 乙酸的处理
取双歧杆菌培养液2.0mL~3.0mL放入10mL离心管中,加入0.2mL50%硫酸溶液(体积分
数),混匀,加入2.0mL丙酮,混匀后加过量氯化钠,剧烈振摇1min,再加入2.0mL乙醚,振摇1min
后,于3000r/min离心5min,将上清液转入另一试管中,下层溶液用2.0mL丙酮和2.0mL乙醚重复
提取2次,合并有机相,于40℃水浴中用氮气吹至尽干,用20mmol/L的磷酸二氢钠溶液(pH2.0)-乙
腈(99+1)溶解并定容至1.0mL,混匀后备用。同样操作步骤处理乙酸标准和空白培养液。
取双歧杆菌培养液2.0mL~3.0mL放入10mL比色管中,100℃水浴10min,加入0.2mL50%
(体积分数)硫酸溶液,混匀,加入1.0mL甲醇,于58℃水浴30min后加水1.0mL,加三氯甲烷
1.0mL,振摇3min,3000r/min离心5min,取三氯甲烷层分析。同样操作步骤处理乳酸标准和空白
培养液。
B.3.3 液相色谱条件
色谱柱:ZorbaxSb-Aq液相色谱柱(4.6×150mm,5μm)或其他等效色谱柱;流动相:20mmol/L
的磷酸二氢钠溶液(pH2.0)-乙腈(99+1),等度洗脱,流速1mL/min;柱温箱:35℃;紫外检测波长:
210nm;外标定量。
B.4 结果计算
A样 -A空
A标 ×c
(B.1)
式中:
X ---样品培养液中乙酸或乳酸的含量,单位为微摩尔每毫升(μmol/mL);
A样 ---样品培养液中乙酸或乳酸的峰面积;
A空 ---空白培养液中乙酸或乳酸的峰面积;
A标 ---乙酸标准或乳酸标准的峰面积;
c ---乙酸标准或乳酸标准的浓度,单位为微摩尔每毫升(μmol/mL)。
相对相差≤15%。
B.6 结果判定
如果乙酸(μmol/mL)与乳酸(μmol/mL)比值大于1,可判定为是双歧杆菌的有机酸代谢产物。


GB 4789.34-2016
GB
NATIONAL STANDARD OF
THE PEOPLE’S REPUBLIC OF CHINA
National Food Safety Standard - Food Microbiological
Examination - Examination of Bifidobacterium
食品安全国家标准
食品微生物学检验 双歧杆菌检验
ISSUED ON. DECEMBER 23, 2016
IMPLEMENTED ON. JUNE 23, 2017
Issued by. National Health and Family Planning Commission of the
People 's Republic of China;
China Food and Drug Administration.
How to BUY & immediately GET a full-copy of this standard?
2. Search --> Add to Cart --> Checkout (3-steps);
3. No action is required - Full-copy of this standard will be automatically &
immediately delivered to your EMAIL address in 0~60 minutes.
Table of Contents
Foreword ... 3 
1 Scope ... 4 
2 Equipment and materials ... 4 
3 Medium and reagent ... 4 
4 Inspection procedures ... 5 
5 Operation steps ... 6 
Annex A Medium and reagent ... 12 
Annex B Detection of organic acid metabolites of Bifidobacterium ... 14 
Foreword
This Standard replaces GB 4789.34-2012 National Food Safety Standard -
Food Microbiological Examination - Identification of Bifidobacterium.
Compared with GB 4789.34-2012, the main changes in this Standard are as
follows.
- added the counting method for Bifidobacterium;
- added MRS medium;
- modified the application scope of this Standard;
- modified Annex B as optional.
National Food Safety Standard - Food Microbiological
Examination - Examination of Bifidobacterium
1 Scope
This Standard specifies the identification and counting method for
Bifidobacterium.
This Standard applies to the identification and counting of pure bacteria strain
of Bifidobacterium. This Standard applies to the identification of bacteria
when the food only contains single Bifidobacterium. This Standard applies to
the counting when the food only contains Bifidobacterium, i.e., the food may
contain one or more different Bifidobacterium species.
2 Equipment and materials
In addition to microbial laboratory routine sterilization and training equipment,
other equipment and materials are as follows.
2.1 Constant temperature incubator. 36°C ± 1°C.
2.2 Refrigerator. 2°C ~ 5°C.
2.3 Balance. resolution of 0.01 g.
2.4 Sterile test tube. 18mm × 180mm, 15mm × 100mm.
2.5 Sterile pipettes. 1mL (with 0.01mL scale), 10mL (with 0.1mL scale) or
micro-pipettes (200μL ~ 1000μL) and matching tips.
2.6 Sterile petri dish. 90 mm in diameter.
3 Medium and reagent
3.1 Bifidobacterium culture medium. see A.1.
3.2 PYG medium. see A.2.
3.3 MRS medium. see A.3.
3.4 Methanol. analytically pure.
5 Operation steps
5.1 Sterile requirements
All operating procedures shall follow the sterile procedures.
5.2 Identification of Bifidobacterium
5.2.1 Pure bacteria species
5.2.1.1 Sample processing. semi-solid or liquid species are directly
inoculated on Bifidobacterium agar plates or MRS agar plates. For solid
bacteria or vacuum freeze-dried bacteria, it shall add an appropriate amount
of sterilized saline or other suitable diluent to dissolve the bacteria powder.
5.2.1.2 Vaccination. inoculate on Bifidobacterium agar plates or MRS agar
extended to 72h ± 2h.
5.2.2 Food sample
5.2.2.1 Sample processing. take 25.0g (mL) of sample into a sterile conical
flask or homogeneous bag containing 225.0mL of physiological saline,
homogenizing at 8000r/min ~ 10000r/min for 1min ~ 2min or using slapping
homogenizer to beat 1min ~ 2min to make 1.10 sample homogenizing
solution. The frozen sample may be thawed at 2°C ~ 5°C for not more than
18h or at a temperature not greater than 45°C for not more than 15min.
5.2.2.2 Inoculation or coating. inoculate the above sample homogenizing
sample homogenizing solution of appropriate dilution to evenly coat on a
Bifidobacterium agar plate or MRS agar plate. Perform anaerobic culture at
36°C ± 1°C for 48h ± 2h that can be extended to 72h ± 2h.
5.2.2.3 Pure culture. pick up three or more individual colonies to inoculate
on Bifidobacterium agar plates or MRS agar plates. Perform anaerobic
culture at 36°C ± 1°C for 48h ± 2h that can be extended to 72h ± 2h.
5.2.3 Identification of bacteria
5.2.3.1 Smear microscopy. pick up Bifidobacterium single colony growing in
Bifidobacterium plate or MRS plate for dyeing. Bifidobacterium is
variety of branches or bifurcation and other forms, non-acid, no spores, no
power.
5.2.3.2 Biochemical identification. pick up Bifidobacterium single colony
5.3.1.2 Preparation of liquid sample. weigh aseptically 1.0mL of sample;
place in 9.0mL of diluent; well mix to make 1.10 sample homogenizing
solution.
5.3.2 Food sample
5.3.2.1 Sample processing. take 25.0g (mL) of sample; place in a sterile
conical flask or homogeneous bag containing 225.0mL of physiological saline,
homogenizer to beat 1min ~ 2min to make 1.10 sample homogenizing
solution. The frozen sample may be thawed at 2°C ~ 5°C for not more than
18h or at 45°C for not more than 15min.
5.3.3 Series dilution and culture
Use a 1mL sterile pipet or micro pipette to prepare 10 times serial sample
homogenizing solution, homogenizing at 8000r/min ~ 10000r/min for 1min ~
2min, or using slapping homogenizer to beat 1min ~ 2min. Dilute once for
every increment, i.e., switch a 1mL sterile pipet or pipet head once. According
to the estimation of the sample concentration, select two to three sample
increment dilution, pipette 1.0mL of sample in the sterile plate. Do two plates
for each dilution. Meanwhile, respectively pipette 1.0mL of blank diluent into
two sterile plates for blank control. Timely pour 15mL ~ 20mL of
Bifidobacterium agar medium cooled to 46°C or MRS agar medium (can be
placed in 46°C ± 1°C constant temperature water bath for insulation) into the
plate, rotate the plate to make it evenly mixed. From sample dilution to plate
pouring, it requires 15 min. After agar solidification, flip the plate, perform
anaerobic culture at 36°C ± 1°C for 48h ± 2h that can be extended to 72h ± 2h.
Count the number of colonies on the plate after incubation.
5.3.4.1 It can be observed with the naked eye, if necessary, with a
magnifying glass or colony counter. Record the dilution factor and the
corresponding number of colonies. The colony counting is expressed in
colony-forming units (CFU).
5.3.4.2 Select the total number of colony colonies counted between 30CFU
and 300CFU, and the total number of colonies without flake colonies. Record
the number of specific colonies on plates below 30CFU. When it exceeds
300CFU, it can be recorded as countless. The number of colonies per dilution
shall be the average of two plates.
used. It shall use the plate without flake colonies as the number of colonies of
this dilution. If the number of flake colonies is less than half of the plate, and
Annex A
Medium and reagent
A.1 Bifidobacterium agar medium
A.1.1 Ingredients
Peptone 15.0 g
Yeast extract 20.0 g
Glucose 20.0 g
Sodium chloride 5.0 g
Tomato extract 400.0 mL
Tween 80 1.0 mL
Liver powder 0.3 g
Agar powder 20.0 g
Adding distilled water to 1000.0 mL
A.1.2 Preparation
A.1.2.1 Preparation of cysteine solution. weigh 0.5 g of cysteine solution,
add into 1.0 mL of hydrochloric acid to make cysteine all dissolved and
A.1.2.2 Preparation of tomato extract. wash the fresh tomatoes and scrape
them; add the same amount of distilled water and heat in a 100°C water bath,
stir for 90 min, then filter with gauze, calibrate to pH 7.0 ± 0.1; after
sub-packaging the leaching solution, autoclave at 121°C for 15 min ~ 20min.
A.1.2.3 Preparation. add all components of A.1.1 into distilled water,
dissolve by heating, and then add into the cysteine solution, calibrate to pH
6.8 ± 0.1; after sub-packaging the leaching solution, autoclave at 121°C for
15 min ~ 20min.
A.2 PYG liquid medium
Peptone 10.0 g
Glucose 2.5 g
Yeast 5.0 g
Cysteine-HCl 0.25 g
Salt solution 20.0 mL
Vitamin K1 solution 0.5 mL
Hemoglobin solution 5 mg/mL 2.5 mL
Adding distilled water to 500.0 mL
Annex B
B.1 Preparation of Bifidobacterium culture medium
Inoculate the Bifidobacterium cultured on Bifidobacterium agar plate or MRS
agar plate into PYG liquid medium. Then use non-inoculated PYG liquid
medium for blank control, anaerobic, culture at 36°C ± 1°C for 48h.
B.2 Preparation of standard solution
B.2.1 Acetic acid standard solution. accurately pipette 5.7 mL of pure acetic
acid, add water and dilute to 100.0 mL, shake and calibrate, prepare about
1.0 mol/L acetic acid standard solution. Calibration method. accurately weigh
3.0 g of acetic acid, add 15.0 mL of water, 2 drops of phenolphthalein
   
宁德梧三商贸有限公司 | 纳税人识别号:91350900MA32WE2Q2X | 营业执照:营业执照证书
点击联络我们 联系电邮郑文锐销售经理: Sales@gb-gbt.cn | Sales@ChineseStandard.net | 电话郑经理: 18059327808 | 增值税普通发票 / 增值税专用发票样品
对公开户银行:中国建设银行古田支行 | 账户名称:宁德梧三商贸有限公司 | 账号:35050168730700000955 对公银行账号证书
翻译支持:全资母公司新加坡场测亚洲公司(https://www.ChineseStandard.net 卖欧美后再内销)
网站备案许可:闽ICP备19012676号
隐私   ·  优质产品   ·  退款政策   ·  公平交易   ·  关于我们