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GB 5009.124-2016

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GB 5009.124-2016 英文版 300 购买 现货,9秒内自动发货PDF,有增值税发票。 食品安全国家标准 食品中氨基酸的测定 有效

   
标准编号: GB 5009.124-2016 (GB5009.124-2016)
中文名称: 食品安全国家标准 食品中氨基酸的测定
英文名称: Determination of amino acids in foods
行业: 国家标准
中标分类: X09
发布日期: 2016-12-23
实施日期: 2017-06-23
旧标准 (被替代): GB/T 5009.124-2003
标准依据: National Health and Family Planning Commission Notice No.17 of 2016

GB 5009.124-2016
National Food Safety Standard -- Determination of Amino Acid in Foods
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
食品中氨基酸的测定
2016-12-23发布
2017-06-23实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 总 局 发 布
前言
本标准代替GB/T 5009.124-2003《食品中氨基酸的测定》。
本标准与GB/T 5009.124-2003相比,主要变化如下.
---标准名称修改为“食品安全国家标准食品中氨基酸的测定”;
---扩大了适用范围;
---增加了方法的检出限和定量限;
---修改了结果计算的公式。
食品安全国家标准
食品中氨基酸的测定
1 范围
本标准规定了用氨基酸分析仪(茚三酮柱后衍生离子交换色谱仪)测定食品中氨基酸的方法。
本标准适用于食品中酸水解氨基酸的测定,包括天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨
酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸共16种氨
基酸。
2 原理
食品中的蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸,经离子交换柱分离后,与茚三酮溶液产生颜色反应,
再通过可见光分光光度检测器测定氨基酸含量。
3 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682中规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 盐酸(HCl).浓度≥36%,优级纯。
3.1.2 苯酚(C6H5OH)。
3.1.3 氮气.纯度99.9%。
3.1.4 柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O).优级纯。
3.1.5 氢氧化钠(NaOH).优级纯。
3.2 试剂配制
3.2.1 盐酸溶液(6mol/L).取500mL盐酸加水稀释至1000mL,混匀。
3.2.2 冷冻剂.市售食盐与冰块按质量1∶3混合。
3.2.3 氢氧化钠溶液(500g/L).称取50g氢氧化钠,溶于50mL水中,冷却至室温后,用水稀释至
100mL,混匀。
3.2.4 柠檬酸钠缓冲溶液[c(Na+)=0.2mol/L].称取19.6g柠檬酸钠加入500mL水溶解,加入
16.5mL盐酸,用水稀释至1000mL,混匀,用6mol/L盐酸溶液或500g/L氢氧化钠溶液调节pH至
2.2。
3.2.5 不同pH和离子强度的洗脱用缓冲溶液.参照仪器说明书配制或购买。
3.2.6 茚三酮溶液.参照仪器说明书配制或购买。
3.3 标准品
3.3.1 混合氨基酸标准溶液.经国家认证并授予标准物质证书的标准溶液。
3.3.2 16种单个氨基酸标准品.固体,纯度≥98%。
3.4 标准溶液配制
3.4.1 混合氨基酸标准储备液(1μmol/mL).分别准确称取单个氨基酸标准品(精确至0.00001g)于
同一50mL烧杯中,用8.3mL6mol/L盐酸溶液溶解,精确转移至250mL容量瓶中,用水稀释定容至
刻度,混匀(各氨基酸标准品称量质量参考值见表1)。
3.4.2 混合氨基酸标准工作液(100nmol/mL).准确吸取混合氨基酸标准储备液1.0mL于10mL容
量瓶中,加pH2.2柠檬酸钠缓冲溶液定容至刻度,混匀,为标准上机液。
4 仪器和设备
4.1 实验室用组织粉碎机或研磨机。
4.2 匀浆机。
4.3 分析天平.感量分别为0.0001g和0.00001g。
4.4 水解管.耐压螺盖玻璃试管或安瓿瓶,体积为20mL~30mL。
4.5 真空泵.排气量≥40L/min。
4.6 酒精喷灯。
4.7 电热鼓风恒温箱或水解炉。
4.8 试管浓缩仪或平行蒸发仪(附带配套15mL~25mL试管)。
4.9 氨基酸分析仪.茚三酮柱后衍生离子交换色谱仪。
5 分析步骤
5.1 试样制备
固体或半固体试样使用组织粉碎机或研磨机粉碎,液体试样用匀浆机打成匀浆密封冷冻保存,分析
用时将其解冻后使用。
5.2 试样称量
均匀性好的样品,如奶粉等,准确称取一定量试样(精确至0.0001g),使试样中蛋白质含量在
10mg~20mg范围内。对于蛋白质含量未知的样品,可先测定样品中蛋白质含量。将称量好的样品
置于水解管中。
很难获得高均匀性的试样,如鲜肉等,为减少误差可适当增大称样量,测定前再做稀释。
对于蛋白质含量低的样品,如蔬菜、水果、饮料和淀粉类食品等,固体或半固体试样称样量不大于
2g,液体试样称样量不大于5g。
5.3 试样水解
根据试样的蛋白质含量,在水解管内加10mL~15mL6mol/L盐酸溶液。对于含水量高、蛋白质
含量低的试样,如饮料、水果、蔬菜等,可先加入约相同体积的盐酸混匀后,再用6mol/L盐酸溶液补充
至大约10mL。继续向水解管内加入苯酚3滴~4滴。
将水解管放入冷冻剂中,冷冻3min~5min,接到真空泵的抽气管上,抽真空(接近0Pa),然后充
入氮气,重复抽真空-充入氮气3次后,在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖。
室温。
打开水解管,将水解液过滤至50mL容量瓶内,用少量水多次冲洗水解管,水洗液移入同一50mL
容量瓶内,最后用水定容至刻度,振荡混匀。
准确吸取1.0mL滤液移入到15mL或25mL试管内,用试管浓缩仪或平行蒸发仪在40℃~
50℃加热环境下减压干燥,干燥后残留物用1mL~2mL水溶解,再减压干燥,最后蒸干。
用1.0mL~2.0mLpH2.2柠檬酸钠缓冲溶液加入到干燥后试管内溶解,振荡混匀后,吸取溶液通
过0.22μm滤膜后,转移至仪器进样瓶,为样品测定液,供仪器测定用。
5.4 测定
5.4.1 仪器条件
及仪器说明书,适当调整仪器操作程序及参数和洗脱用缓冲溶液试剂配比,确认仪器操作条件。
5.4.2 色谱参考条件
a) 色谱柱.磺酸型阳离子树脂;
b) 检测波长.570nm和440nm。
5.4.3 试样的测定
混合氨基酸标准工作液和样品测定液分别以相同体积注入氨基酸分析仪,以外标法通过峰面积计
算样品测定液中氨基酸的浓度。
6 分析结果的表述
6.1 混合氨基酸标准储备液中各氨基酸浓度的计算
表1 配制混合氨基酸标准储备液时氨基酸标准品的称量质量参考值及分子量
氨基酸
标准品名称
称量质量参考值
mg
摩尔质量
g/mol
氨基酸
标准品名称
mg
摩尔质量
g/mol
L-天门冬氨酸 33 133.1 L-蛋氨酸 37 149.2
L-苏氨酸 30 119.1 L-异亮氨酸 33 131.2
L-丝氨酸 26 105.1 L-亮氨酸 33 131.2
L-谷氨酸 37 147.1 L-酪氨酸 45 181.2
L-脯氨酸 29 115.1 L-苯丙氨酸 41 165.2
甘氨酸 19 75.07 L-组氨酸盐酸盐 52 209.7
L-缬氨酸 29 117.2 L-精氨酸盐酸盐 53 210.7
混合氨基酸标准储备液中各氨基酸的含量按式(1)计算.
cj=
mj
Mj×250
×1000 (1)
式中.
cj ---混合氨基酸标准储备液中氨基酸j的浓度,单位为微摩尔每毫升(μmol/mL);
mj ---称取氨基酸标准品j的质量,单位为毫克(mg);
250 ---定容体积,单位为毫升(mL);
1000 ---换算系数。
结果保留4位有效数字。
6.2 样品中氨基酸含量的计算
样品测定液氨基酸的含量按式(2)计算.
ci=
cs
As×
Ai (2)
ci ---样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);
Ai ---试样测定液氨基酸i的峰面积;
As ---氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;
cs ---氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)。
试样中各氨基酸的含量按式(3)计算.
Xi=
ci×F×V×M
m×109
×100 (3)
Xi ---试样中氨基酸i的含量,单位为克每百克(g/100g);
ci ---试样测定液中氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);
F ---稀释倍数;
V ---试样水解液转移定容的体积,单位为毫升(mL);
M ---氨基酸i的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol),各氨基酸的名称及摩尔质量见表2;
m ---称样量,单位为克(g);
109 ---将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系数;
100 ---换算系数。
表2 16种氨基酸的名称和摩尔质量
天门冬氨酸 133.1 蛋氨酸 149.2
苏氨酸 119.1 异亮氨酸 131.2
丝氨酸 105.1 亮氨酸 131.2
谷氨酸 147.1 酪氨酸 181.2
脯氨酸 115.1 苯丙氨酸 165.2
甘氨酸 75.1 组氨酸 155.2
丙氨酸 89.1 赖氨酸 146.2
缬氨酸 117.2 精氨酸 174.2
试样氨基酸含量在1.00g/100g以下,保留2位有效数字;含量在1.00g/100g以上,保留3位有
7 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的12%。
8 其他
当试样为固体或半固体时,最大试样量为2g,干燥后溶解体积为1mL,各氨基酸的检出限和定量
限见表3。
表3 固体样品中各氨基酸的检出限和定量限
氨基酸名称 检出限/(g/100) 定量限/(g/100) 氨基酸名称 检出限/(g/100) 定量限/(g/100)
天门冬氨酸 0.00013 0.00036 异亮氨酸 0.00043 0.0013
苏氨酸 0.00014 0.00048 亮氨酸 0.0011 0.0036
谷氨酸 0.00024 0.00070 苯丙氨酸 0.0025 0.0083
甘氨酸 0.00025 0.00084 赖氨酸 0.00013 0.00044
丙氨酸 0.0029 0.0097 组氨酸 0.00059 0.0020
缬氨酸 0.00012 0.00032 精氨酸 0.0020 0.0065
蛋氨酸 0.0023 0.0075 脯氨酸 0.0026 0.0087
当试样为液体时,最大试样量为5g,干燥后溶解体积为1mL,各氨基酸的检出限和定量限见表4。
表4 液体样品中各氨基酸的检出限和定量限
氨基酸名称 检出限/(g/100) 定量限/(g/100) 氨基酸名称 检出限/(g/100) 定量限/(g/100)
天门冬氨酸 0.000050 0.00014 异亮氨酸 0.00015 0.00050
丝氨酸 0.000072 0.00024 酪氨酸 0.0011 0.0038
谷氨酸 0.000090 0.00028 苯丙氨酸 0.00099 0.0033
甘氨酸 0.00010 0.00034 赖氨酸 0.000053 0.00018
丙氨酸 0.0012 0.0039 组氨酸 0.00024 0.00079
缬氨酸 0.000050 0.00013 精氨酸 0.00078 0.0026
蛋氨酸 0.00090 0.0030 脯氨酸 0.0010 0.0035
附 录 A
色 谱 图
混合氨基酸标准工作液色谱图见图A.1。
b) vis2检测波长440nm时
图A.1 混合氨基酸标准工作液色谱图

GB 5009.124-2016
GB
NATIONAL STANDARD OF THE
PEOPLE’S REPUBLIC OF CHINA
National Food Safety Standard
– Determination of Amino Acid in Foods
食品安全国家标准 食品中氨基酸的测定
ISSUED ON. DECEMBER 23, 2016
IMPLEMENTED ON. JUNE 23, 2017
Issued by. National Health and Family Planning Commission of PRC;
China Food and Drug Administration.
Table of Contents
Foreword ... 3
1 Scope ... 4
2 Principle ... 4
3 Reagents and Materials ... 4
4 Instrument and Equipment ... 5
5 Analytical Procedures ... 6
6 Expression of Analytical Results ... 8
7 Precision ... 10
8 Others ... 10
Appendix A Chromatogram ... 12
Foreword
This Standard replaces GB/T 5009.124-2003 Determination of Amino Acid in Foods.
Compared with GB/T 5009.124-2003, this Standard has the major changes as follows.
--- Modify the standard name into “National Food Safety Standard – Determination
of Amino Acid in Foods”;
--- Expand the applicable scope;
--- Add the limit of detection and quantitative limit of the method;
--- Modify the result calculation formula.
National Food Safety Standard
– Determination of Amino Acid in Foods
1 Scope
This Standard specifies using the amino acid analyzer (ninhydrin post-column
derivatization ion exchange chromatography) to determine the amino acid in foods.
This Standard is applicable to determine the amino acid hydrolyzed by acid in foods,
there are totally 16 kinds of amino acids such as aspartic acid, threonine, serine,
glutamic acid, proline, glycine, alanine, valine, methionine, isoleucine, leucine, tyrosine,
phenylalanine, histidine, lysine, and arginine.
2 Principle
The protein in food is hydrolyzed by hydrochloric acid into free amino acid; after being
separated by ion exchange column, it occurs color reaction with ninhydrin solution;
then determine the amino acid content through the visible light spectrophotometer.
3 Reagents and Materials
Unless otherwise specified, the reagents used in this method are analytically pure;
while water is Class-I water stipulated in GB/T 6682.
3.1 Reagents
3.1.1 Hydrochloric acid (HCl). concentration≥36%, guarantee reagent.
3.1.2 Phenol (C6H5OH).
3.1.3 Nitrogen. with purity of 99.9%.
3.1.4 Sodium citrate (Na3C6H5O7•2H2O). guarantee reagent.
3.1.5 Sodium hydroxide (NaOH). guarantee reagent.
3.2 Reagents preparation
3.2.1 Hydrochloric acid solution (6mol/L). take 500mL of hydrochloric acid, dilute with
water to 1000mL, mix evenly.
3.2.2 Refrigerant. mix the commercial salt and ice by the mass ratio of 1.3.
Place the hydrolysis tube into the refrigerant, frozen for 3min~5min; connect to the
suction tube of vacuum pump; pump vacuum (close to 0Pa); then inject nitrogen;
repeatedly pump vacuum, inject nitrogen, after 3 times, seal the cap or tighten the
screw cap under nitrogen injecting state.
Place the sealed hydrolysis tube into 110°C±1°C electric blower thermostat or
hydrolysis furnace; hydrolyze for 22h, then take out; cooling off to the room
temperature.
Open the hydrolysis tube, filter the hydrolysate into 50mL volumetric flask; use small
amount of water to wash the hydrolysis tube for several times; transfer the washing
liquid into the same 50mL volumetric flask; finally use water to make constant volume
to the scale; shake and mix evenly.
Accurately pipette 1.0mL of filtrate into 15mL or 25mL test tube; use the test tube
concentrator or parallel evaporator to reduce pressure to dry at the 40°C~50°C heating
temperature environment; after drying, the residuals shall use 1mL~2mL of water to
Add 1.0mL~2.0mL of sodium citrate buffer solution with pH 2.2 into the test tube after
drying to dissolve; after shaking and mixing evenly; absorb the solution to get through
the 0.22µm filter film; transfer into the instrument sample-injecting bottle; it is the
sample assay solution for the measurement of the instrument.
5.4 Determination
5.4.1 Instrument conditions
Inject the mixed amino acid standard working solution into the automatic amino acid
analyzer; refer to the test protocol and instrument manual of the amino acid analyzer
stipulated in JJG1064-2011; appropriately adjust the instrument operation procedures,
conditions.
5.4.2 Chromatographic reference conditions
a) chromatographic column. sulfonic acid cation resin;
b) detection wavelength. 570nm and 440nm.
5.4.3 Determination of specimen
Inject the same volume of amino acid standard working solution and sample assay
solution into the amino acid analyzer; calculate the concentration of amino acid in the
sample assay solution through the peak area by external standard method.
   
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