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GB 5009.235-2016

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GB 5009.235-2016 英文版 320 购买 现货,9秒内自动发货PDF,有增值税发票。 食品安全国家标准 食品中氨基酸态氮的测定 有效

   
标准编号: GB 5009.235-2016 (GB5009.235-2016)
中文名称: 食品安全国家标准 食品中氨基酸态氮的测定
英文名称: Method for analysis of hygienic standard for grain paste
行业: 国家标准
字数估计: 7,751
发布日期: 2016-08-31
实施日期: 2017-03-01
旧标准 (被替代): SB/T 10310-1999; GB/T 5009.40-2003部分; GB/T 5009.39-2003部分
标准依据: 国家卫生和计划生育委员会公告2016年第11号

GB 5009.235-2016
(Food safety national standard - Determination of amino acid nitrogen in foods)
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
食品中氨基酸态氮的测定
2016-08-31发布
2017-03-01实施
中 华 人 民 共 和 国
国家卫生和计划生育委员会 发 布
前言
本标准代替GB/T 5009.39-2003《酱油卫生标准的分析方法》中4.2氨基酸态氮,GB/T 5009.40-
2003《酱卫生标准的分析方法》中4.1氨基酸态氮,SB/T 10310-1999《黄豆酱检验方法》中3.3氨基氮。
本标准与GB/T 5009.39-2003相比,主要变化如下:
---标准名称修改为“食品安全国家标准食品中氨基酸态氮的测定”;
---扩充了第一法的适用范围;
---修改了原标准的结构。
食品安全国家标准
食品中氨基酸态氮的测定
1 范围
本标准规定了酱油、酱、黄豆酱中氨基酸态氮的测定方法。
本标准第一法适用于以粮食和其副产品豆饼、麸皮等为原料酿造或配制的酱油,以粮食为原料酿造
的酱类,以黄豆、小麦粉为原料酿造的豆酱类食品中氨基酸态氮的测定;第二法适用于以粮食和其副产
品豆饼、麸皮等为原料酿造或配制的酱油中氨基酸态氮的测定。
第一法 酸度计法
2 原理
利用氨基酸的两性作用,加入甲醛以固定氨基的碱性,使羧基显示出酸性,用氢氧化钠标准溶液滴
定后定量,以酸度计测定终点。
3 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的三级水。
3.1 试剂
3.1.1 甲醛(36%~38%):应不含有聚合物(没有沉淀且溶液不分层)。
3.1.2 氢氧化钠(NaOH)。
3.1.3 酚酞(C20H14O4)。
3.1.4 乙醇(CH3CH2OH)。
3.1.5 邻苯二甲酸氢钾(HOOCC6H4COOH):基准物质。
3.2 试剂配制
氢氧化钠标准滴定溶液 [c(NaOH)=0.050mol/L]:经国家认证并授予标准物质证书的标准滴定
溶液或配制方法如下:
a) 酚酞指示液:称取酚酞1g,溶于95%的乙醇中,用95%乙醇稀释至100mL。
b) 氢氧化钠溶液[氢氧化钠标准滴定溶液c(NaOH)=0.05mol/L]:称取110g氢氧化钠于
250mL的烧杯中,加100mL的水,振摇使之溶解成饱和溶液,冷却后置于聚乙烯的塑料瓶
中,密塞,放置数日,澄清后备用。取上层清液2.7mL,加适量新煮沸过的冷蒸馏水至1000mL,
摇匀。
c) 氢氧化钠标准滴定溶液的标定:准确称取约0.36g在105℃~110℃干燥至恒重的基准邻苯
二甲酸氢钾,加80mL新煮沸过的水,使之尽量溶解,加2滴酚酞指示液(10g/L),用氢氧化
钠溶液滴定至溶液呈微红色,30s不褪色。记下耗用氢氧化钠溶液毫升数。同时做空白试验。
d) 计算:氢氧化钠标准滴定溶液的浓度按式(1)计算:
c=
(V1-V2)×0.2042
(1)
式中:
c ---氢氧化钠标准滴定溶液的实际浓度,单位为摩尔每升(mol/L);
m ---基准邻苯二甲酸氢钾的质量,单位为克(g);
V1 ---氢氧化钠标准溶液的用量体积,单位为毫升(mL);
V2 ---空白实验中氢氧化钠标准溶液的用量体积,单位为毫升(mL);
0.2042---与1.00mL氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=1.000mol/L]相当的基准邻苯二
甲酸氢钾的质量,单位为克(g)。
4 仪器和设备
4.1 酸度计(附磁力搅拌器)。
4.2 10mL微量碱式滴定管。
4.3 分析天平:感量0.1mg。
5 分析步骤
5.1 酱油试样
称量5.0g试样于50mL的烧杯中,用水分数次洗入100mL容量瓶中,加水至刻度,混匀后吸取
20.0mL置于200mL烧杯中,加60mL水,开动磁力搅拌器,用氢氧化钠标准溶液[c(NaOH)=
0.050mol/L]滴定至酸度计指示pH为8.2,记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数,可计算总酸含
量。加入10.0mL甲醛溶液,混匀。再用氢氧化钠标准滴定溶液继续滴定至pH为9.2,记下消耗氢氧
化钠标准滴定溶液的毫升数。同时取80mL水,先用氢氧化钠标准溶液[c(NaOH)=0.050mol/L]调
节至pH为8.2,再加入10.0mL甲醛溶液,用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至pH 为9.2,做试剂空白
试验。
5.2 酱及黄豆酱样品
将酱或黄豆酱样品搅拌均匀后,放入研钵中,在10min内迅速研磨至无肉眼可见颗粒,装入磨口瓶
中备用。用已知重量的称量瓶称取搅拌均匀的样品5.0g,用50mL80℃左右的蒸馏水分数次洗入
100mL烧杯中,冷却后,转入100mL容量瓶中,用少量水分次洗涤烧杯,洗液并入容量瓶中,并加水至
刻度,混匀后过滤。吸取滤液10.0mL,置于200mL烧杯中,加60mL水,开动磁力搅拌器,用氢氧化
钠标准溶液[c(NaOH)=0.050mol/L]滴定至酸度计指示pH为8.2,记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液
的毫升数,可计算总酸含量。加入10.0mL甲醛溶液,混匀。再用氢氧化钠标准滴定溶液继续滴定至
pH为9.2,记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数。同时取80mL水,先用氢氧化钠标准溶液
[c(NaOH)=0.050mol/L]调节至pH为8.2,再加入10.0mL甲醛溶液,用氢氧化钠标准滴定溶液滴
定至pH为9.2,做试剂空白试验。
试样中氨基酸态氮的含量按式(2)进行计算:
X=
(V1-V2)×c×0.014
m×V3/V4 ×
100 (2)
式中:
X ---试样中氨基酸态氮的含量,单位为克每百克(g/100g);
V1 ---测定用试样稀释液加入甲醛后消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL);
V2 ---试剂空白实验加入甲醛后消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL);
0.014---与1.00mL氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=1.000mol/L]相当的氮的质量,单位为
克(g);
m ---称取试样的质量,单位为克(g);
V3 ---试样稀释液的取用量,单位为毫升(mL);
V4 ---试样稀释液的定容体积,单位为毫升(mL);
100 ---单位换算系数。
计算结果保留两位有效数字。
7 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
8 原理
在pH为4.8的乙酸钠-乙酸缓冲液中,氨基酸态氮与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄色的3,5-二乙酸-
2,6-二甲基-1,4二氢化吡啶氨基酸衍生物。在波长400nm处测定吸光度,与标准系列比较定量。
9 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的二级水。
9.1 试剂
9.1.1 乙酸(CH3COOH)。
9.1.2 无水乙酸钠(CH3COONa)或乙酸钠(CH3COONa·3H2O)。
9.1.3 甲醇(CH3OH)。
9.2 试剂配制
9.2.1 乙酸溶液(1mol/L):量取5.8mL冰乙酸,加水稀释至100mL。
9.2.2 乙酸钠溶液(1mol/L):称取41g无水乙酸钠或68g乙酸钠(CH3COONa·3H2O),加水溶解
后并稀释至500mL。
9.2.3 乙酸钠-乙酸缓冲液:量取60mL乙酸钠溶液(1mol/L)与40mL乙酸溶液(1mol/L)混合,该溶
液pH为4.8。
9.2.4 显色剂:15mL37%甲醇与7.8mL乙酰丙酮混合,加水稀释至100mL,剧烈振摇混匀(室温下
放置稳定3d)。
9.3 标准溶液配制
水溶解后移至100mL容量瓶中,并稀释至刻度,混匀,此溶液每毫升相当于1.0mg氨氮(10℃下冰箱
内贮存稳定1年以上)。
9.3.2 氨氮标准使用溶液(0.1g/L):用移液管精确量取10mL氨氮标准储备液(1.0mg/mL)于100mL
容量瓶内,加水稀释至刻度,混匀,此溶液每毫升相当于100μg氨氮(10℃下冰箱内贮存稳定1个月)。
10 仪器和设备
10.1 分光光度计。
10.2 电热恒温水浴锅(100℃±0.5℃)。
10.3 10mL具塞玻璃比色管。
11 分析步骤
称量1.00g试样于50mL容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀。
11.2 标准曲线的制作
精密吸取氨氮标准使用溶液0mL、0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL(相
当于NH3-N0μg、5.0μg、10.0μg、20.0μg、40.0μg、60.0μg、80.0μg、100.0μg)分别于10mL比色管
中。向各比色管分别加入4mL乙酸钠-乙酸缓冲溶液(pH4.8)及4mL显色剂,用水稀释至刻度,混匀。
置于100℃水浴中加热15min,取出,水浴冷却至室温后,移入1cm比色皿内,以零管为参比,于波长
400nm处测量吸光度,绘制标准曲线或计算线性回归方程。
11.3 试样的测定
精密吸取2mL试样稀释溶液于10mL比色管中。加入4mL乙酸钠-乙酸缓冲溶液(pH4.8)及
1cm比色皿内,以零管为参比,于波长400nm处测量吸光度。试样吸光度与标准曲线比较定量或代入
线性回归方程,计算试样含量。
12 分析结果的表述
试样中氨基酸态氮的含量按式(3)进行计算:
X=
m1×1000×1000×V1/V2×
100(3)
式中:
X ---试样中氨基酸态氮的含量,单位为克每百克(g/100g);
m1 ---称取试样的质量,单位为克(g);
V1 ---测定用试样溶液体积,单位为毫升(mL);
V2 ---试样前处理中的定容体积,单位为毫升(mL);
100、1000---单位换算系数。
13 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
14 其他
本方法的检出限为0.0070mg/100g,定量限为0.0210mg/100g。

GB 5009.235-2016
GB
NATIONAL STANDARD OF THE
PEOPLE’S REPUBLIC OF CHINA
National Food Safety Standard -
Determination of Amino Acid Nitrogen in Foods
食品安全国家标准
食品中氨基酸态氮的测定
ISSUED ON: AUGUST 31, 2016
IMPLEMENTED ON: MARCH 01, 2017
Issued by: National Health and Family Planning Commission of the PRC
Table of Contents
Foreword ...3
1 Scope ...4
2 Principle ...4
3 Reagents and materials ...4
4 Instruments and apparatuses ...6
5 Analysis steps ...6
6 Description of the analysis result ...7
7 Precision ...7
8 Principle ...8
9 Reagents and materials ...8
10 Instruments and apparatuses ...9
11 Analysis steps ...9
12 Description of the analysis result ... 10
13 Precision ... 10
14 Others ... 10
National Food Safety Standard -
Determination of Amino Acid Nitrogen in Foods
1 Scope
This Standard specifies the method for determination of amino acid nitrogen in soy
sauce, grain paste and soybean paste.
Method 1 of this Standard applies to the determination of amino acid nitrogen in soy
sauce which is brewed or prepared from grain and its by-products such as bean cake
and bran, sauce which is made from grain, AND soybean paste products which are
made from soybean and wheat flour. Method 2 applies to the determination of amino
acid nitrogen in soy sauce which is brewed or prepared from grain and its by-products
such as bean cake and bran.
Method 1 - PH meter
2 Principle
Use the amphoteric effect of amino acid; add formaldehyde to fix the basicity of the
amino group and to make the carboxyl group acidic; use sodium hydroxide standard
solution to titrate and fix-volume; use the pH meter to determine the end.
3 Reagents and materials
Unless otherwise specified, all the reagents in this method are analytical reagents, the
water is grade-3 water that is specified by GB/T 6682.
3.1 Reagents
3.1.1 Formaldehyde (36%~38%): it shall not contain polymer (no precipitation and no
stratification of the solution).
3.1.2 Sodium hydroxide (NaOH).
3.1.3 Phenolphthalein (C20H14O4).
3.1.4 Ethanol (CH3CH2OH).
3.1.5 Potassium hydrogen phthalate (HOOCC6H4COOH): reference material.
4 Instruments and apparatuses
4.1 PH meter (with magnetic stirrer).
4.2 10 mL micro-basic burette.
4.3 Analytical balance: the sensitivity is 0.1mg.
5 Analysis steps
5.1 Soy sauce sample
Weigh 5.0 g of sample into a 50 mL beaker; use water to wash it into a 100 mL
volumetric flask for several times; add water to the scale; mix and take 20.0 mL into a
200 mL beaker; add 60 mL of water; turn on the magnetic stirrer; use sodium hydroxide
standard solution [c(NaOH) = 0.050 mol/L] to titrate until the pH meter indicates a pH
of 8.2; record the number of milliliters of the sodium hydroxide standard titration
solution which is consumed to calculate the total acid content. Add 10.0 mL of
formaldehyde solution and mix. Use sodium hydroxide standard titration solution to
further titrate until the pH reaches 9.2; record the number of milliliters of the sodium
hydroxide standard titration solution which is consumed. At the same time, take 80 mL
of water; firstly, use sodium hydroxide standard solution [c(NaOH) = 0.050 mol/L] to
adjust to pH 8.2; then add 10.0 mL of formaldehyde solution; use sodium hydroxide
5.2 Grain paste and soybean paste samples
Evenly stir the grain paste or soybean paste sample; place it in a mortar, and rapidly
ground it to a state that no visible particles are seen in 10 minutes; place it in a grinding
bottle for use. Use a weighing bottle of a known weight to weigh 5.0 g of the sample
which is evenly stirred; use 50 mL of distilled water at about 80°C to wash it into a 100
mL beaker for several times; cool it, and transfer it to a 100 mL volumetric flask; use a
small amount of water to wash the beaker for several times; merge the cleaning
mixture into a volumetric flask; add water to the scale; mix and filter. Pipette 10.0 mL
of filtrate; place it in a 200 mL beaker; add 60 mL of water; turn on the magnetic stirrer;
meter indicates pH 8.2; record the number of milliliters of sodium hydroxide standard
titration solution that is consumed, so as to calculate the total acid content. Add 10.0
mL of formaldehyde solution and mix. Use sodium hydroxide standard titration solution
to further titrate until the pH reaches 9.2; record the number of milliliters of the sodium
hydroxide standard titration solution which is consumed. At the same time, take 80 mL
of water; firstly, use sodium hydroxide standard solution [c(NaOH) = 0.050 mol/L] to
adjust to pH 8.2; then add 10.0 mL of formaldehyde solution; use sodium hydroxide
standard titration solution to titrate to pH 9.2; do a reagent blank test.
Every milliliter of the solution is equivalent to 1.0 mg of ammonia-nitrogen (it can be
9.3.2 Ammonia-nitrogen standard working solution (0.1 g/L): use a pipette to
accurately measure 10 mL of ammonia-nitrogen standard stock solution (1.0 mg/mL)
in a 100 mL volumetric flask; add water to dilute to the scale; mix. Every milliliter of
this solution is equivalent to 100 μg of ammonia-nitrogen (it can be stably stored in the
refrigerator below 10°C for 1 month).
10 Instruments and apparatuses
10.1 Spectrophotometry.
10.2 Electric constant-temperature water bath (100°C ± 0.5°C).
10.3 10 mL glass colorimetric tube with a plug.
11.1 Sample pretreatment
Weigh 1.00 g of sample into a 50 mL volumetric flask; add water to dilute to the scale;
mix well.
11.2 Preparation of the standard curve
Accurately extract 0 mL, 0.05 mL, 0.1 mL, 0.2 mL, 0.4 mL, 0.6 mL, 0.8 mL, 1.0 mL of
ammonia-nitrogen standard working solution (equivalent to 0 μg, 5.0 μg, 10.0 μg, 20.0
μg, 40.0 μg, 60.0 μg, 80.0 μg, 100.0 μg of NH3-N) into a 10 mL colorimetric tube
respectively. Add 4 mL of sodium acetate-acetic acid buffer solution (pH 4.8) and 4 mL
of color developer to each colorimetric tube; use water to dilute to the scale; mix well.
to room temperature in the water bath, transfer it to a 1 cm cuvette; use a zero-tube
as the reference; measure the absorbance at a wavelength of 400 nm; draw the
standard curve or calculate the linear regression equation.
11.3 Determination of the sample
Accurately extract 2 mL of sample dilution solution into a 10 mL colorimetric tube. Add
4 mL of sodium acetate-acetic acid buffer solution (pH 4.8) and 4 mL of color developer;
use water to dilute to the scale; mix well. Place it in a water bath at 100°C to heat for
15 min; then take it out; after it is cooled to room temperature in the water bath, transfer
it to a 1 cm cuvette; use a zero tube as the reference; measure the absorbance at a
quantitatively or substitute it into the linear regression equation to calculate the sample
   
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