9秒发货/有发票 梧三标准英文版 优质技术翻译  数据库收录:159759 最近更新:2020-03-15  
支付宝/对公账号 首页   询价  购买流程  英文样品 公司简介   购物车

GB 5009.86-2016

标准搜索结果: 'GB 5009.86-2016'
标准号码内文价格(元)第2步交付天数标准名称状态
GB 5009.86-2016 英文版 580 购买 现货,9秒内自动发货PDF,有增值税发票。 食品安全国家标准 食品中抗坏血酸的测定 有效

   
标准详细信息 GB 5009.86-2016; GB5009.86-2016
中文名称: 食品安全国家标准 食品中抗坏血酸的测定
英文名称: (Food safety national standard - Determination of ascorbic acid in foods)
行业: 国家标准
字数估计: 11,000
发布日期: 2016-08-31
实施日期: 2017-03-01
旧标准 (被替代): GB/T 6195-1986; GB/T 5009.86-2003; GB/T 5009.159-2003
标准依据: 国家卫生和计划生育委员会公告2016年第11号

GB 5009.86-2016
National Food Safety Standard -- Determination of Ascorbic Acid in Foods
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
食品中抗坏血酸的测定
2016-08-31发布
2017-03-01实施
中 华 人 民 共 和 国
国家卫生和计划生育委员会 发 布
前言
本标准代替GB/T 5009.86-2003《蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定(荧光法和2,4-二硝基
苯肼法)》、GB/T 5009.159-2003《食品中还原型抗坏血酸的测定》和GB 6195-1986《水果、蔬菜维生素
C含量测定法(2,6-二氯靛酚滴定法)》。
本标准与GB/T 5009.86-2003相比,主要变化如下.
---标准名称修改为“食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定”;
---扩大了方法的适用范围;
---增加了高效液相色谱法及相关方法的定量限;
---删除了2,4-二硝基苯肼法;
---增加了2,6-二氯靛酚滴定法;
---按照GB/T 20001.4-2015对原标准的结构进行了修改。
食品安全国家标准
食品中抗坏血酸的测定
1 范围
本标准规定了高效液相色谱法、荧光法、2,6-二氯靛酚滴定法测定食品中抗坏血酸的方法。
本标准第一法适用于乳粉、谷物、蔬菜、水果及其制品、肉制品、维生素类补充剂、果冻、胶基糖果、八
宝粥、葡萄酒中的L(+)-抗坏血酸、D(+)-抗坏血酸和L(+)-抗坏血酸总量的测定。第二法适用于乳
粉、蔬菜、水果及其制品中L(+)-抗坏血酸总量的测定。第三法适用于水果、蔬菜及其制品中L(+)-抗
坏血酸的测定。
2 术语和定义
2.1 抗坏血酸.一种具有抗氧化性质的有机化合物。又称为“维生素C”,是人体必需的营养素之一。
2.2 L(+)-抗坏血酸.左式右旋光抗坏血酸。具有强还原性,对人体具有生物活性。
2.3 D(+)-抗坏血酸.又称异抗坏血酸。具有强还原性,但对人体基本无生物活性。
2.4 L(+)-脱氢抗坏血酸.L(+)-抗坏血酸极易被氧化为L(+)-脱氢抗坏血酸,L(+)-脱氢抗坏血酸
亦可被还原为L(+)-抗坏血酸。通常称为脱氢抗坏血酸。
2.5 L(+)-抗坏血酸总量.将试样中L(+)-脱氢抗坏血酸还原成的L(+)-抗坏血酸或将试样中
L(+)-抗坏血酸氧化成的L(+)-脱氢抗坏血酸后测得的L(+)-抗坏血酸总量。
第一法 高效液相色谱法
3 原理
试样中的抗坏血酸用偏磷酸溶解超声提取后,以离子对试剂为流动相,经反相色谱柱分离,其中
L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸直接用配有紫外检测器的液相色谱仪(波长245nm)测定;试样中
的L(+)-脱氢抗坏血酸经L-半胱氨酸溶液进行还原后,用紫外检测器(波长245nm)测定L(+)-抗坏
血酸总量,或减去原样品中测得的L(+)-抗坏血酸含量而获得L(+)-脱氢抗坏血酸的含量。以色谱峰
的保留时间定性,外标法定量。
4 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 试剂
4.1.1 偏磷酸(HPO3)n.含量(以HPO3 计)≥38%。
4.1.2 磷酸三钠(Na3PO4·12H2O)。
4.1.3 磷酸二氢钾(KH2PO4)。
4.1.4 磷酸(H3PO4).85%。
4.1.5 L-半胱氨酸(C3H7NO2S).优级纯。
4.1.6 十六烷基三甲基溴化铵(C19H42BrN).色谱纯。
4.1.7 甲醇(CH3OH).色谱纯。
4.2 试剂配制
4.2.1 偏磷酸溶液(200g/L).称取200g(精确至0.1g)偏磷酸(4.1.1),溶于水并稀释至1L,此溶液保
存于4℃的环境下可保存一个月。
4.2.2 偏磷酸溶液(20g/L).量取50mL200g/L偏磷酸溶液,用水稀释至500mL。
4.2.3 磷酸三钠溶液(100g/L).称取100g(精确至0.1g)磷酸三钠,溶于水并稀释至1L。
4.2.4 L-半胱氨酸溶液(40g/L).称取4gL-半胱氨酸,溶于水并稀释至100mL。临用时配制。
4.3 标准品
4.3.1 L(+)-抗坏血酸标准品(C6H8O6).纯度≥99%。
4.3.2 D(+)-抗坏血酸(异抗坏血酸)标准品(C6H8O6).纯度≥99%。
4.4 标准溶液配制
4.4.1 L(+)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000mg/mL).准确称取L(+)-抗坏血酸标准品0.01g(精确至
0.01mg),用20g/L的偏磷酸溶液定容至10mL。该贮备液在2℃~8℃避光条件下可保存一周。
4.4.2 D(+)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000mg/mL).准确称取D(+)-抗坏血酸标准品0.01g(精确
至0.01mg),用20g/L的偏磷酸溶液定容至10mL。该贮备液在2℃~8℃避光条件下可保存一周。
4.4.3 抗坏血酸混合标准系列工作液.分别吸取L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸标准贮备液0mL,
0.05mL,0.50mL,1.0mL,2.5mL,5.0mL,用20g/L的偏磷酸溶液定容至100mL。标准系列工作液
中L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸的浓度分别为0μg/mL、0.5μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、
25.0μg/mL、50.0μg/mL。临用时配制。
5 仪器和设备
5.1 液相色谱仪.配有二极管阵列检测器或紫外检测器。
5.2 pH计.精度为0.01。
5.3 天平.感量为0.1g、1mg、0.01mg。
5.4 超声波清洗器。
5.5 离心机.转速≥4000r/min。
5.6 均质机。
5.7 滤膜.0.45μm水相膜。
5.8 振荡器。
整个检测过程尽可能在避光条件下进行。
6.1 试样制备
6.1.1 液体或固体粉末样品.混合均匀后,应立即用于检测。
6.1.2 水果、蔬菜及其制品或其他固体样品.取100g左右样品加入等质量20g/L的偏磷酸溶液,经均
质机均质并混合均匀后,应立即测定。
6.2 试样溶液的制备
称取相对于样品约0.5g~2g(精确至0.001g)混合均匀的固体试样或匀浆试样,或吸取2mL~
10mL液体试样[使所取试样含L(+)-抗坏血酸约0.03mg~6mg]于50mL烧杯中,用20g/L的偏
磷酸溶液(4.2.2)将试样转移至50mL容量瓶中,震摇溶解并定容。摇匀,全部转移至50mL离心管
可同时分别测定试样中L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸的含量]。
6.3 试样溶液的还原
准确吸取20mL上述离心后的上清液于50mL离心管中,加入10mL40g/L的L-半胱氨酸溶液
(4.2.4),用100g/L磷酸三钠溶液调节pH至7.0~7.2,以200次/min振荡5min。再用磷酸调节pH
至2.5~2.8,用水将试液全部转移至50mL容量瓶中,并定容至刻度。混匀后取此试液过0.45μm水相
滤膜后待测[由此试液可测定试样中包括脱氢型的L(+)-抗坏血酸总量]。
若试样含有增稠剂,可准确吸取4mL经L-半胱氨酸溶液还原的试液,再准确加入1mL甲醇,混
匀后过0.45μm滤膜后待测。
6.4 仪器参考条件
6.4.2 检测器.二极管阵列检测器或紫外检测器。
6.4.3 流动相.A.6.8g磷酸二氢钾和0.91g十六烷基三甲基溴化铵,用水溶解并定容至1L(用磷酸调
pH至2.5~2.8);B.100%甲醇。按A∶B=98∶2混合,过0.45μm滤膜,超声脱气。
6.4.4 流速.0.7mL/min。
6.4.5 检测波长.245nm。
6.4.6 柱 温.25℃。
6.4.7 进样量.20μL。
6.5 标准曲线制作
分别对抗坏血酸混合标准系列工作溶液进行测定,以L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]标准溶
制标准曲线或计算回归方程。L(+)-抗坏血酸、D(+)-抗坏血酸标准色谱图参见附录A中图A.1。
6.6 试样溶液的测定
对试样溶液进行测定,根据标准曲线得到测定液中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的浓度
(μg/mL)。
6.7 空白试验
空白试验系指除不加试样外,采用完全相同的分析步骤、试剂和用量,进行平行操作。
7 分析结果的表述
试样中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的含量和L(+)-抗坏血酸总量以毫克每百克表示,
按式(1)计算.
(c1-c0)×V
m×1000 ×
F×K×100 (1)
式中.
X ---试样中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸、L(+)-抗坏血酸总量]的含量,单位为毫克
每百克(mg/100g);
c1 ---样液中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);
c0 ---样品空白液中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的质量浓度,单位为微克每毫升
(μg/mL);
m ---实际检测试样质量,单位克(g);
1000---换算系数(由μg/mL换算成mg/mL的换算因子);
F ---稀释倍数(若使用6.3还原步骤时,即为2.5);
K ---若使用6.3中甲醇沉淀步骤时,即为1.25;
100 ---换算系数(由mg/g换算成mg/100g的换算因子)。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。
8 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
9 其他
均为2.0mg/100g。液体样品取样量为10g(或10mL)时,L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸的检出
限均为0.1mg/100g(或0.1mg/100mL),定量限均为0.4mg/100g(或0.4mg/100mL)。
第二法 荧光法
10 原理
试样中L(+)-抗坏血酸经活性炭氧化为L(+)-脱氢抗坏血酸后,与邻苯二胺(OPDA)反应生成有
荧光的喹唔啉(quinoxaline),其荧光强度与L(+)-抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比,以此测定试
样中L(+)-抗坏血酸总量。
注.L(+)-脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应,以此排除试样中荧光杂质产生的干扰。
11 试剂和材料
11.1 试剂
11.1.1 偏磷酸(HPO3)n.含量(以HPO3 计)≥38%。
11.1.2 冰乙酸(CH3COOH).浓度约为30%。
11.1.3 硫酸(H2SO4).浓度约为98%。
11.1.4 乙酸钠(CH3COONa)。
11.1.5 硼酸(H3BO3)。
11.1.6 邻苯二胺(C6H8N2)。
11.1.7 百里酚蓝(C27H30O5S)。
11.1.8 活性炭粉。
11.2.1 偏磷酸-乙酸溶液.称取15g偏磷酸,加入40mL冰乙酸及250mL水,加温,搅拌,使之逐渐溶
解,冷却后加水至500mL。于4℃冰箱可保存7d~10d。
11.2.2 硫酸溶液(0.15mol/L).取8.3mL硫酸,小心加入水中,再加水稀释至1000mL。
11.2.3 偏磷酸-乙酸-硫酸溶液.称取15g偏磷酸,加入40mL冰乙酸,滴加0.15mol/L硫酸溶液至溶
解,并稀释至500mL。
11.2.4 乙酸钠溶液(500g/L).称取500g乙酸钠,加水至1000mL。
11.2.5 硼酸-乙酸钠溶液.称取3g硼酸,用500g/L乙酸钠溶液溶解并稀释至100mL。临用时配制。
11.2.6 邻苯二胺溶液(200mg/L).称取20mg邻苯二胺,用水溶解并稀释至100mL,临用时配制。
11.2.7 酸性活性炭.称取约200g活性炭粉(75μm~177μm),加入1L盐酸(1+9),加热回流1h~2h,
检验铁离子方法.利用普鲁士蓝反应。将20g/L亚铁氰化钾与1%盐酸等量混合,将上述洗出滤
液滴入,如有铁离子则产生蓝色沉淀。
11.2.8 百里酚蓝指示剂溶液(0.4mg/mL).称取0.1g百里酚蓝,加入0.02mol/L氢氧化钠溶液约
10.75mL,在玻璃研钵中研磨至溶解,用水稀释至250mL。(变色范围.pH等于1.2时呈红色;pH等
于2.8时呈黄色;pH大于4时呈蓝色)。
11.3 标准品
L(+)-抗坏血酸标准品(C6H8O6).纯度≥99%。
11.4 标准品的配制
11.4.1 L(+)-抗坏血酸标准溶液(1.000mg/mL).称取L(+)-抗坏血酸0.05g(精确至0.01mg),用
11.4.2 L(+)-抗坏血酸标准工作液(100.0μg/mL).准确吸取L(+)-抗坏血酸标准液10mL,用偏磷
酸-乙酸溶液稀释至100mL,临用时配制。
12 仪器和设备
荧光分光光度计.具有激发波长338nm及发射波长420nm。配有1cm比色皿。
13 分析步骤
整个检测过程应在避光条件下进行。
13.1 试液的制备
称取约100g(精确至0.1g)试样,加100g偏磷酸-乙酸溶液,倒入捣碎机内打成匀浆,用百里酚蓝
指示剂测试匀浆的酸碱度。如呈红色,即称取适量匀浆用偏磷酸-乙酸溶液稀释;若呈黄色或蓝色,则称
而定。当试样液中抗坏血酸含量在40μg/mL~100μg/mL之间,一般称取20g(精确至0.01g)匀浆,
用相应溶液稀释至100mL,过滤,滤液备用。
13.2 测定
13.2.1 氧化处理.分别准确吸取50mL试样滤液及抗坏血酸标准工作液于200mL具塞锥形瓶中,加
入2g活性炭,用力振摇1min,过滤,弃去最初数毫升滤液,分别收集其余全部滤液,即为试样氧化液和
标准氧化液,待测定。
13.2.2 分别准确吸取10mL试样氧化液于两个100mL容量瓶中,作为“试样液”和“试样空白液”。
13.2.3 分别准确吸取10mL标准氧化液于两个100mL容量瓶中,作为“标准液”和“标准空白液”。
13.2.4 于“试样空白液”和“标准空白液”中各加5mL硼酸-乙酸钠溶液,混合摇动15min,用水稀释至
13.2.5 于“试样液”和“标准液”中各加5mL的500g/L乙酸钠溶液,用水稀释至100mL,待测。
13.3 标准曲线的制备
准确吸取上述“标准液”[L(+)-抗坏血酸含量10μg/mL]0.5mL,1.0mL,1.5mL,2.0mL,分别置
于10mL具塞刻度试管中,用水补充至2.0mL。另准确吸取“标准空白液”2mL于10mL带盖刻度试
管中。在暗室迅速向各管中加入5mL邻苯二胺溶液,振摇混合,在室温下反应35min,于激发波长
338nm、发射波长420nm处测定荧光强度。以“标准液”系列荧光强度分别减去“标准空白液”荧光强
度的差值为纵坐标,对应的L(+)-抗坏血酸含量为横坐标,绘制标准曲线或计算直线回归方程。
13.4 试样测定
分别准确吸取2mL“试样液”和“试样空白液”于10mL具塞刻度试管中,在暗室迅速向各管中加
荧光强度。以“试样液”荧光强度减去“试样空白液”的荧光强度的差值于标准曲线上查得或回归方程计
算测定试样溶液中L(+)-抗坏血酸总量。
14 结果计算
试样中L(+)-抗坏血酸总量,结果以毫克每百克表示,按式(2)计算.
X=
c×V
m ×F×
(2)
式中.
c ---由标准曲线查得或回归方程计算的进样液中L(+)-抗坏血酸的质量浓度,单位为微克
每毫升(μg/mL);
V ---荧光反应所用试样体积,单位为毫升(mL);
m ---实际检测试样质量,单位克(g);
F ---试样溶液的稀释倍数;
100 ---换算系数;
1000---换算系数。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。
15 精密度
16 其他
当样品取样量为10g时,L(+)-抗坏血酸总量的检出限为0.044mg/100g,定量限为0.7mg/
100g。
第三法 2,6-二氯靛酚滴定法
17 原理
用蓝色的碱性染料2,6-二氯靛酚标准溶液对含L(+)-抗坏血酸的试样酸性浸出液进行氧化还原
滴定,2,6-二氯靛酚被还原为无色,当到达滴定终点时,多余的2,6-二氯靛酚在酸性介质中显浅红色,由
2,6-二氯靛酚的消耗量计算样品中L(+)-抗坏血酸的含量。
18 试剂和材料
18.1 试剂
18.1.1 偏磷酸(HPO3)n.含量(以HPO3 计)≥38%。
18.1.2 草酸(C2H2O4)。
18.1.3 碳酸氢钠(NaHCO3)。
18.1.4 2,6-二氯靛酚(2,6-二氯靛酚钠盐,C12H6Cl2NNaO2)。
18.1.5 白陶土(或高岭土).对抗坏血酸无吸附性。
18.2 试剂的配制
18.2.1 偏磷酸溶液(20g/L).称取20g偏磷酸,用水溶解并定容至1L。
18.2.2 草酸溶液(20g/L).称取20g草酸,用水溶解并定容至1L。
后称取2,6-二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却并用水定容至250mL,过滤至棕色瓶
内,于4℃~8℃环境中保存。每次使用前,用标准抗坏血酸溶液标定其滴定度。
标定方法.准确吸取1mL抗坏血酸标准溶液于50mL锥形瓶中,加入10mL偏磷酸溶液或草酸
溶液,摇匀,用2,6-二氯靛酚溶液滴定至粉红色,保持15s不褪色为止。同时另取10mL偏磷酸溶液或
草酸溶液做空白试验。2,6-二氯靛酚溶液的滴定度按式(3)计算.
T=
c×V
V1-V0
(3)
T ---2,6-二氯靛酚溶液的滴定度,即每毫升2,6-二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数,单位为
毫克每毫升(mg/mL);
c ---抗坏血酸标准溶液的质量浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL);
V ---吸取抗坏血酸标准溶液的体积,单位为毫升(mL);
V1---滴定抗坏血酸标准溶液所消耗2,6-二氯靛酚溶液的体积,单位为毫升(mL);
V0---滴定空白所消耗2,6-二氯靛酚溶液的体积,单位为毫升(mL)。
18.3 标准品
L(+)-抗坏血酸标准品(C6H8O6).纯度≥99%。
18.4 标准溶液的配制
溶于偏磷酸溶液或草酸溶液并定容至100mL。该贮备液在2℃~8℃避光条件下可保存一周。
19 测定
整个检测过程应在避光条件下进行。
19.1 试液制备.称取具有代表性样品的可食部分100g,放入粉碎机中,加入100g偏磷酸溶液或草酸
溶液,迅速捣成匀浆。准确称取10g~40g匀浆样品(精确至0.01g)于烧杯中,用偏磷酸溶液或草酸溶
液将样品转移至100mL容量瓶,并稀释至刻度,摇匀后过滤。若滤液有颜色,可按每克样品加0.4g白
陶土脱色后再过滤。
19.2 滴定.准确吸取10mL滤液于50mL锥形瓶中,用标定过的2,6-二氯靛酚溶液滴定,直至溶液呈
粉红色15s不褪色为止。同时做空白试验。
试样中L(+)-抗坏血酸含量按式(4)计算.
X=
(V-V0)×T×A
m ×100
(4)
式中.
X ---试样中L(+)-抗坏血酸含量,单位为毫克每百克(mg/100g);
V ---滴定试样所消耗2,6-二氯靛酚溶液的体积,单位为毫升(mL);
V0---滴定空白所消耗2,6-二氯靛酚溶液的体积,单位为毫升(mL);
(mg/mL);
A ---稀释倍数;
m ---试样质量,单位为克(g)。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。
21 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值,在L(+)-抗坏血酸含量大于20mg/100g
时不得超过算术平均值的2%。在L(+)-抗坏血酸含量小于或等于20mg/100g时不得超过算术平均
值的5%。
附 录 A
第一法L(+)-抗坏血酸、D(+)-抗坏血酸标准色谱图见图A.1。
图A.1 L(+)-抗坏血酸、D(+)-抗坏血酸标准色谱图

GB 5009.86-2016
GB
NATIONAL STANDARD OF THE
PEOPLE’S REPUBLIC OF CHINA
National Food Safety Standard -
Determination of Ascorbic Acid in Foods
食品安全国家标准
食品中抗坏血酸的测定
ISSUED ON. AUGUST 31, 2016
IMPLEMENTED ON. MARCH 1, 2017
Issued by. National Health and Family Planning Commission of the
People's Republic of China
How to BUY & immediately GET a full-copy of this standard?
2. Search --> Add to Cart --> Checkout (3-steps);
3. No action is required - Full-copy of this standard will be automatically &
immediately delivered to your EMAIL address in 0~60 minutes.
Table of Contents
Foreword ... 3 
1 Scope .. 4 
2 Terms and definitions ... 4 
3 Principle.. 5 
4 Reagents and materials .. 5 
5 Instruments and equipment ... 6 
6 Analysis steps ... 7 
7 Expression of analysis results .. 8 
8 Precision... 9 
9 Other ... 9 
10 Principle... 10 
11 Reagents and materials .. 10 
12 Instruments and equipment .. 11 
13 Analysis steps .. 12 
14 Result calculation ... 13 
15 Precision .. 14 
16 Other .. 14 
17 Principle... 14 
18 Reagents and materials.. 14 
19 Determination ... 16 
20 Result calculation ... 16 
21 Precision .. 17 
Annex A L(+)- ascorbic acid, D(+)- ascorbic acid standard chromatogram ... 18 
Foreword
This Standard replaces GB/T 5009.86-2003 Determination of total ascorbic acid
in fruits, vegetables and derived products - Fluorometric method, GB/T
5009.159-2003 Determination of reductive-form ascorbic acid in foods and GB
6195-1986 Determination of vitamin C in vegetables and fruits (2,6-dechloro-
indophenol titration method).
Compared with GB/T 5009.86-2003, the main changes are as follows.
- modified the standard name to “National Food Safety Standard-
Determination of Ascorbic Acid in Foods”;
- expanded the application scope of the method;
- added the high-performance liquid chromatography and related
quantitation limitations;
- deleted 2,4-dinitrophenylhydrazine method;
- added 2,6-dichloro-indophenol titration;
- modified the structure of the previous edition according to GB/T 20001.4-
2015.
National Food Safety Standard -
Determination of Ascorbic Acid in Foods
1 Scope
This Standard specifies the high-performance liquid chromatography,
fluorescence method, 2,6-dichloro-indophenol titration method for the
determination of ascorbic acid in food.
Method One of this Standard applies to the determination of total amount of
L(+)- ascorbic acid, D(+)- ascorbic acid and L(+)- ascorbic acid in milk powder,
cereals, vegetables, fruits and their products, meat products, vitamin
supplements, jellies, gummies, rice pudding, wine. Method Two is applicable to
the determination of L(+)- total amount of ascorbic acid in milk powder,
vegetables, fruits and their products. Method Three applies to the determination
of L(+)- total amount of ascorbic acid in fruits, vegetables and their products.
2 Terms and definitions
known as "Vitamin C," one of the essential nutrients in human body.
2.2 L(+)- ascorbic acid. left-right rotation ascorbic acid that has a strong
reduction. It has biological activity on the human body.
2.3 D(+)- ascorbic acid. also known as isoascorbic acid. It has a strong
reduction, but basically, it has no biological activity on the human body.
2.4 L(+)- dehydroascorbic acid. L(+)- ascorbic acid is easily oxidized to L(+)-
dehydroascorbic acid; L(+)- dehydroascorbic acid can also be reduced to L(+)-
ascorbic acid. It is often called as dehydroascorbic acid.
2.5 L(+)- total amount of ascorbic acid. total amount of ascorbic acid obtained
OR L(+)- dehydroascorbic acid is oxidized by L(+)- ascorbic acid in the sample.
Method One -- High performance liquid
chromatography
3 Principle
After ascorbic acid in the sample is dissolved with metaphosphoric acid and
extracted by sonication, use ion-pair reagent as mobile phase. Separate it
through reverse phase column. L(+)- ascorbic acid and D(+)- ascorbic acid are
measured directly with a liquid chromatograph (wavelength of 245 nm)
equipped with a UV detector. After L(+)- dehydroascorbate in the sample is
determined by measuring the total amount of L(+)- ascorbic acid with a UV
detector (wavelength of 245 nm) or by subtracting the L(+)- ascorbic acid
content measured in the original sample. Determine the nature by the retention
time of chromatographic peak. Quantify in external standard method.
4 Reagents and materials
Unless otherwise specified, the reagents used in this method are of analytical
grade pure, water is of grade one specified in GB/T 6682.
4.1 Reagents
4.1.1 Metaphosphoric acid (HPO3)n. content (calculated as HPO3) ≥38%
4.1.3 Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4)
4.1.4 Phosphoric acid (H3PO4). 85%
4.1.5 L-cysteine (C3H7NO2S). excellent grade pure
4.1.6 Cetyltrimethylammonium bromide (C19H42BrN). chromatographically
pure
4.1.7 Methanol (CH3OH). chromatographically pure
4.2 Reagent preparation
4.2.1 Methanophosphoric acid solution (200 g/L). weigh 200 g (to the nearest
of 0.1 g) of metaphosphoric acid (4.1.1), dissolve in water and dilute to 1 L; this
4.2.2 Methanophosphoric acid solution (20 g/L). weigh 50 mL of 200 g/L
partial phosphoric acid solution; dilute in water to 500 mL.
4.2.3 Trisodium phosphate solution (100 g/L). weigh 100 g (to the nearest of
0.1g) of trisodium phosphate; dissolve in water and dilute to 1 L.
6.4.1 Chromatographic column. C18 column, column length of 250 mm, inner
diameter of 4.6 mm, particle size of 5 μm, or chromatographic column of same
performance.
6.4.2 Detector. diode array detector or UV detector
6.4.3 Mobile phase. A. 6.8 g of potassium dihydrogen phosphate and 0.91 g
L (adjust pH to 2.5 ~ 2.8 with phosphoric acid); B. 100% methanol. Mix
according to A.B=98.2; make it through 0.45 μm filter membrane; perform
ultrasonic degassing.
6.4.4 Flow rate. 0.7 mL/min
6.4.5 Detection wavelength. 245 nm
6.4.6 Column temperature. 25°C
6.4.7 Injection volume. 20 μL
6.5 Making of standard curve
Respectively determine the ascorbic acid mixed standard series of working
ascorbic acid [or D(+)- ascorbic acid] as abscissa, L(+)- ascorbate [or D(+)-
ascorbate] peak height or peak area as ordinate to draw standard curve or
calculate regression equation. See Figure A.1 in Annex A for L(+)- ascorbic acid,
D(+)- ascorbic acid standard chromatogram.
6.6 Determination of sample solution
Determine the sample solution. Obtain the concentration (μg/mL) of L(+)-
ascorbate [or D(+)- ascorbate] according to the standard curve.
6.7 Blank test
The blank test refers that perform parallel operation by using identical analysis
7 Expression of analysis results
The amount of L(+)- ascorbic acid [or D(+)- ascorbic acid] and the total amount
of L(+)- ascorbic acid in the sample are expressed in milligrams per hundred
grams, calculated according to equation (1).
11.2.3 Metaphosphoric acid - acetic acid - sulfuric acid solution. weigh 15 g of
metaphosphoric acid; add 40 mL of glacial acetic acid; drop 0.15 mol/L sulfuric
acid solution till it is dissolved; and dilute to 500 mL.
11.2.4 Sodium acetate solution (500 g/L). weigh 500 g of sodium acetate; add
water to 1000 mL.
sodium acetate solution to dissolve and dilute to 100 mL. Prepare when using.
11.2.6 Phenylenediamine solution (200 mg/L). weigh 20 mg of O-
phenylenediamine; dissolve with water and dilute to 100 mL; prepare when
using.
11.2.7 Activated carbon. weigh about 200 g of activated carbon powder (75µm
~ 177µm); add into 1L of hydrochloric acid (1+9); heat to reflux 1h. Filter. Wash
with water until the filtrate is free of iron ions. Place in a 110°C ~ 120°C oven
for 10h, spare for use.
Test method for iron ion. using Prussian blue reaction. Mix 20 g/L potassium
filtrate. If there are iron ions, a blue precipitate shall be generated.
11.2.8 Thymol blue indicator solution (0.4 mg/mL). weigh 0.1g of thymol blue;
add about 10.75 mL of 0.02 mol/L sodium hydroxide solution; grind to dissolve
in a glass mortar; dilute to 250 mL with water. (discoloration range. red at pH
equal to 1.2; yellow at pH equal to 2.8; blue at pH >4).
11.3 Standard product
L(+)- ascorbic acid standard product (C6H8O6). purity ≥99%
11.4 Preparation of standard product
11.4.1 L(+)- ascorbate standard solution (1.000 mg/mL). weigh 0.05 g of L(+)-
acetic acid solution and dilute to 50 mL. This stock solution can be stored at
2°C ~ 8°C from light for one week.
11.4.2 L(+)- ascorbic acid standard working solution (100.0 μg/mL).
accurately pipette 10 mL of L(+)- ascorbate standard solution; dilute to 100 mL
with metaphosphoric acid-acetic acid solution; prepare when using.
12 Instruments and equipment
Fluorescence spectrophotometer. with an excitation wavelength of 338nm and
100 - conversion factor;
1000 - conversion factor.
independent determinations obtained under repeatability conditions, resulting
in the retention of three significant figures.
15 Precision
The absolute difference between two independent determination results
obtained under repeatability conditions shall not exceed 10% of the arithmetic
mean.
16 Other
When the sampling amount is 10 g, the detection limit of total L(+)- ascorbic
acid is 0.044 mg/100g, the limit of quantification is 0.7 mg/100g.
17 Principle
Use blue basic dye 2,6-dichloro-indophenol standard solution to perform redox
titration on acid leachate sample containing L(+)- ascorbic acid. 2,6-dichloro-
indophenol is reduced to colorless. At the end of the titration, excess 2,6-
dichloro-indophenol is colored as light red in an acidic medium. The content of
L(+)- ascorbic acid in the sample is calculated from the consumption of 2,6-
dichloro-indophenol.
18 Reagents and materials
Unless otherwise specified, the reagents used in this method are of analytical
   
宁德梧三商贸有限公司 | 纳税人识别号:91350900MA32WE2Q2X | 营业执照:营业执照证书
点击联络我们 联系电邮郑文锐销售经理: Sales@gb-gbt.cn | Sales@ChineseStandard.net | 电话郑经理: 18059327808 | 增值税普通发票 / 增值税专用发票样品
对公开户银行:中国建设银行古田支行 | 账户名称:宁德梧三商贸有限公司 | 账号:35050168730700000955 对公银行账号证书
翻译支持:全资母公司新加坡场测亚洲公司(https://www.ChineseStandard.net 卖欧美后再内销)
网站备案许可:闽ICP备19012676号 http://www.beian.miit.gov.cn
隐私   ·  优质产品   ·  退款政策   ·  公平交易   ·  关于我们